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細胞增殖(Cell proliferation)多向檢測,尋找做細胞增殖的你!

細胞增殖(Cell proliferation)多向檢測,尋找做細胞增殖的你!

細胞增殖(Cell proliferation)多向檢測

尋找做細胞增殖的你!

 

當我們做細胞實驗,包括:藥物篩選、病毒轉染、疾病模型、細胞毒性實驗,細胞增殖的定性和定量,成為細胞學研究不二之選。
當我們需要對增殖細胞進行準確定量,那麼CCK8將會在電子耦合試劑存在的情況下,為粒線體內的活性脫氫酶驗明正身;
當需要觀察增殖細胞型態並定量,EdU會代替胸腺嘧啶(T)合成DNA,並暴露在免疫螢光、流式細胞術檢測下,從而進入我們的視野。
當然,對於研究細胞增殖,還有眾多的實驗方法共同上陣,現在就讓我們來對它們進行一個詳細的比較吧!

 

類型 方法 優點 缺點
直接計數法 利用計數版或計數儀得出細胞的數目。  簡單,省錢,試劑和儀器普通,結果準確。 不適合樣品數量多的情況,不適合評估特定的細胞亞群。
3H-TdR摻入法 同位素3H標記的TdR作為DNA合成的前驅物摻入DNA合成過程,從而被液體閃爍計數器檢測到。 3H-TdR摻入法敏感性高,重複性好。 樣品需經過變性或酵素處理。變性條件可能破壞細胞、組織形態;實驗步驟繁瑣;有一定細胞毒性,不適合長期活體研究

   Brdu檢測法

BrdU代替胸腺嘧啶(T)合成DNA,並用螢光標記。 經抗原抗體反應可放大信號,可結合其他標記進行同步研究。 樣品需經過變性或酵素處理。變性條件可能破壞細胞、組織形態;實驗步驟繁瑣;有一定細胞毒性,不適合長期活體研究
 EdU  檢測法 EdU代替胸腺嘧啶(T)合成DNA,並用螢光標記。 利用Click反應可以快速進行檢測,不依賴於抗體,不需變性DNA,同樣適合多重標記分析,步驟簡單。 具有較強的細胞毒性,不適合長期活體研究。

 MTT 檢測法

活性脫氫酶將黃色的MTT分解成藍紫色的不溶性甲䐶,並沉積在活細胞中,死細胞無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲䐶,在490nm波長處測定其吸光值。

價格便宜,使用廣泛。

受藥物本身的顏色、培養基的顏色、血清的濃度使結果的變異較大

CCK-8檢測法

MTT的升級版,細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。 由於CCK-8生成的formazan是水溶性的,不需要吸出培養液加入有機溶劑溶解這個步驟,因此可以減少一定的誤差。重複性優於MTT;對細胞毒性小;為1瓶即用型溶液。 CCK-8價格相對於MTT,較昂貴。
CFSE檢測法 一種可穿透細胞膜的螢光染料,可利用不可逆方式與細胞內的氨基結合偶聯到細胞蛋白質上,是一種良好的細胞標記。 螢光信號強,細胞毒性低。通常用於長時程追蹤細胞的增殖狀況,並且兼容活體動物實驗 最終的數據獲取,需要借助流式細胞儀。而資料分析,也需要使用帶有增殖分析功能的特殊軟體來拉曲線。
核抗原Ki-67染色法 Ki-67染色,研究人員可以評估處於細胞週期所有活躍期的總增殖細胞的百分比。 類似石蠟切片、冷凍切片等已經失去活性的樣本,就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記。 只能對固定細胞、組織進行觀察。

 

細胞增殖會產生諸多重要改變,包括 DNA 的合成、細胞代謝增加、增殖特異性蛋白的表達等。
基於新一代 AbFluor ™ 螢光染色技術,Abbkine 開發出能直接從 DNA level精準檢測細胞增殖狀態的EdU kit (Cat No. KTA2030 和 KTA2031);同時,還開發出通過細胞代謝實現高通量檢測細胞增殖狀態的CCK8 kit (Cat No. KTA1020 和 BMU106-EN)。
基於以上原理,Abbkine因應廣大客戶的需要,開發出Cell Proliferation Assay Cocktail (Cat No. KTD103-EN),包含經專利設計的細胞毒性Positive control,可完美解決目前增殖檢測結果的非標準化問題。

▲Fig.1 HEK293 and L929 cells in the positive control group were induced by cytotoxicity inducer for 30 min, while the control group was not given any treatment. Enhanced Cell Counting Kit-8 (CCK-8) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 and L929 cells after cytotoxicity induction.

 

▲Fig.2 Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) was used to detect the cytotoxicity of HEK293 cells after cytotoxicity induction.

 

功能合併後的Cell Proliferation Assay Cocktail優勢如下:

1. 細胞增殖研究的標準化解決方案:經專利設計的細胞毒性Positive control,可完美解決目前增殖檢測結果的非標準化問題;

2. 通用型凋亡檢測套組:可直接準確地檢測細胞增殖狀態,也可選擇高通量檢測,覆蓋了絕大多數細胞增殖 / 毒性檢測的需求。

如圖所示,Cell Proliferation Assay Cocktail套組設計巧妙,可見一斑:

Product Name Component Cat No. Size
Cell Proliferation Assay Cocktail  Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) KTD103-EN 100T
 Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 2000T
 Cytotoxicity Positive Control 100T

 

上述兩大類方法,均是在活細胞、活組織中進行的。但如果面對的是類似石蠟切片、冰凍切片等已經失去活性的樣本,就只能利用免疫染色的方法來觀察活躍增殖分子標記了。
目前最受歡迎和認可的增殖標記是Ki-67Cat No. ABM40064)(全名MKI67,marker of proliferation Ki-67),這個分子標記同時也是多種癌症病理診斷指標之一,下圖為人類子宮癌組織的Ki-67免疫組織化學染色。在細胞質、細胞核和細胞膜上均有表達。