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【Proteintech】 免疫螢光結果不理想,可能是固定劑和通透劑的鍋?!

【Proteintech】 免疫螢光結果不理想,可能是固定劑和通透劑的鍋?!

【Proteintech】 免疫螢光結果不理想,可能是固定劑通透劑的鍋 ?!

在所有抗體相關實驗當中,如果說西方點墨法(WB, Western blot)是最樸素無華的,那免疫螢光(IF,​ Immunofluorescence)一定是最絢爛奪目的那個!

道理我們都懂,IF實驗也做完了~
可是,為什麼我的蛋白定位和別人做的不一致呢?

FEN1抗體(貨號:14768-1-AP)染NIH/3T3細胞

FEN1是一種結構特異性核酸酶,理論上應在細胞核 (nucleus) 表達,前人研究中免疫螢光結果與預期一致,細胞核染色(左圖)。而右圖為使用相同的抗體anti-FEN1(貨號:14768-1-AP)染乙醇固定的NIH/3T3細胞 ,結果細胞質染色,與預期及前人結果相悖。

 

不要慌! 作為抗體應用專家,免疫螢光小能手,小編這就給研究人員們整理一些,為什麼會出現螢光信號不符的情況?究竟是什麼原因呢?

1. 固定劑
做過細胞IF實驗的小夥伴都知道,在取得樣本之後,很重要的一步就是要對細胞進行固定。固定,顧名思義就是將細胞“固定”起來,這樣能長久的保持細胞形態和抗原狀態,讓抗原能夠與抗體更充分且更穩定地結合。

可有多少實驗者知道,固定劑也會影響蛋白(抗原 antigen)的亞細胞定位(指某種蛋白或表達產物在細胞內的具體存在部位。例如蛋白於核內、胞質內或者細胞膜上存在)實驗結果?

例如,我們研究部分核蛋白(nucleoprotein)時發現如果採用乙醇(ethanol)固定,就會出現細胞質(cytosol)染色的結果。