ChromoTek — 60 mins 完成免疫沉澱實驗，這技術愛了愛了！

產品DM｜GFP-Trap® for Immunoprecipitation

上篇文章我們提到ChromoTek奈米抗體的發現史和應用優勢，大家可能還是沒有具體概念，不知道這個技術到底是不是如官方說的這麼厲害，會不會只是業務在吹牛 ! 這裡不做過多的辯解，畢竟都是生科人，那我們就用科學的方式來釐清吧，來！上data！

本次實驗以ChromoTek的GFP-Trap作為主角，用實例展示一下奈米抗體的優越性。

GFP-Trap是ChromoTek旗下Nano-Traps系列最具代表產品之一。Trap是陷阱、捕捉器的意思，顧名思義GFP-Trap就是捕捉GFP（或攜帶GFP Tag的fusion protein）的一種技術。其原理是通過將anti-GFP的羊駝奈米抗體，與固相載體（agarose beads, magnetic agarose beads, Dynabeads or multiwell plates等）直接共價連接，形成一個高效能捕捉GFP的工具。

通過這個GFP-Trap工具，我們可以快速的沉澱高純度的GFP融合蛋白。具體有多快速呢？沒有比較沒有傷害，上圖！

▲上圖左邊是通過GFP-Trap進行IP實驗，右邊是通過傳統GFP抗體進行IP實驗

（註：I代表Input，FT代表Flow Through，B代表Bound，hc代表heavy chain，lc代表light chain）。

通過以上實驗結果我們不難判斷出：

（1） GFP-Trap不僅親和力高，並且與目標結合緊密，能完全抓取蛋白（ FT中幾乎沒有GFP融合蛋白的漏網之魚）；而傳統抗體需要藉助Protein A/G才能與beads相連，其結合能力較弱，且部分抗體與蛋白會脫落，抓取蛋白不完全（FT中有明顯的殘存GFP融合蛋白條帶）。

（2） GFP-Trap採用的是羊駝單域抗體 (Alpaca single domain antibody)，只有一個VHH結構域，完全不存在重鏈（heavy chain）和輕鏈 (light chain)干擾；而傳統抗體存在重鏈和輕鏈解體的情況；在結果中會出現重鏈和輕鏈兩條非特異性條帶，這個問題平常看似問題不大，但是如果你在免疫沉澱實驗中的目標蛋白位置剛好也落在55kDa或 25kDa，那就有點棘手了，因為heavy chain & light chain的大小就剛好是55kDa & 25kDa。

當然啦，上圖的結果還是不能展示整個IP過程的迅速，為此我們還進行了下面實驗：

▲上圖左邊是通過GFP-Trap針對EGFP蛋白進行IP實驗，以抗體與蛋白incubate時間長短做為實驗步驟的變因。（註：I代表Input，FT代表flow through，B代表bound）。

根據以上實驗結果我們不難發現：

（3） GFP-Trap對EGFP蛋白具有高效的捕獲能力， 30 mins基本可以捕獲所有目標蛋白（ FT中基本無殘留的EGFP條帶）。做過IP實驗的朋友，想想整個IP過程中什麼最費時？不就是抗體incubate嗎？少則3-4 hrs，多則4℃過夜！如果採用GFP-Trap，咱們甚至可以在60 mins內，完成一個IP實驗！（時間即是最珍貴的資源，聰明的就懂。）

除了以上三個優點之外，GFP-Trap還有一項黑科技。

（4） GFP-Trap在各種緩衝液中表現出超凡的穩定性，即便在高鹽（2M NaCl）、表面活性劑（2% NP-40 、1% SDS、1% Triton X-100、3% Deoxycholate）、還原劑（1mM DTT或0.2mM TCEP）、離液劑（3M Guanidinium•HCl、8M Urea）、高溫（68℃）的環境中，我們的GFP-Trap依舊能將GFP融合蛋白穩穩地抓住！