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活細胞影像觀察—研究界的直播主:Chromobody

活細胞影像觀察—研究界的直播主:Chromobody

   

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活細胞影像觀察— 研究界的直播主:Chromobody

 

▲(圖一) 

應用無極限! 只有奈米抗體能夠超越自己!奈米抗體內標化:基於奈米抗體為單體、重組表達的特點,與其輕盈的體積,Chromotek將奈米抗體的序列編碼與螢光蛋白的序列融合,放置於表達的質體 (plasmid) 中,打造出可轉染至細胞,直接於活細胞中表現與螢光蛋白偶聯的奈米抗體的Chromobody (圖一),實現直接螢光標定活細胞中的內源蛋白質,目標內源蛋白的一舉一動實況轉播(圖二)!

 

 
Time lapse video of Actin-Chromobodies expressed in HeLa cells, which have been exposed to Cytochalasin D treatment for 1 hour and then recovered for 4 hours.
Cell Cycle-Chromobody expressed in HeLa cells. The time lapse video shows cell division. The signal of TagRFP has been imaged

▲(圖二)

 

奈米抗體的靈巧體積讓活細胞感覺好自在

Chromobody經過多重驗證,不僅可有效、專一地與目標蛋白結合,更不會干擾其生物學功能,Melak et al. 2017的文獻指出與多種標定Actin的方法(圖三)相比,Actin-Chromody是對Actin的干擾最小的標定方式 (Table 1)。

 

▲(圖三)

 



Table 1: Overview of stte-of-the-art technologies/probes to visualize actin filaments:

Melak M, Plessner M, Grosse R. Actin visualization at a glance. J Cell Sci. 2017 Feb 1;130(3):525-530. doi: 10.1242/jcs.189068. Epub 2017 Jan 12. Erratum in: J Cell Sci. 2017 May 1;130(9):1688. PMID: 28082420.

 

使用Chromodoby,不用導致:

  • 細胞生存異常、遷移
  • 遺傳物質改變、交錯
  • 影響細胞功能
  • 在過度表達螢光融合蛋白時顯示細胞毒性效應

 

成就高解析美圖美景,不用美圖修修

如同螢光奈米二抗的最大優勢:其靈巧的體積等同於減少抗原表位和訊號標記物之間的距離 (圖四),是高解析率顯微鏡的理想探針,例如: STED (STimulated Emission Depletion (縮寫STED))、STORM (Stochastic Optical Rwjeconstruction Microscopy , 隨機光學重建顯微鏡系統) 等系統。用於活細胞動態攝影則大大降低影像模糊、動態殘影等影響後續分析的問題。